Главная / Здоровье / Капиллярный электрофорез 1 / ЭКСТРАКЦИЯ, ФИЛЬТРАЦИЯ И ДИАЛИЗ

ЭКСТРАКЦИЯ, ФИЛЬТРАЦИЯ И ДИАЛИЗ

Оцените статью

Традиционная экстракция с помощью растворителей используется в ВЭКЭ не только для очистки небольших молекул, но и для концентрирования и удаления из пробы ионов и белков. В последнее десятилетие стало очень популярным вместо растворителей использовать твердофазную экстракцию (ТФЭ), которая дает возможность широкого выбора сорбентов. Более того, крупные фракции ВЭЖХ-сорбентов могут использоваться в ВЭКЭ для ТФЭ очистки пробы. Но эти методы нежелательны для массового анализа, т. к. требуют много времени и соответствующей квалификации персонала.

Большие молекулы можно отделять от небольших с помощью специального диализа и мембранных фильтров для молекул разных молекулярных масс. При этом небольшие диализные ячейки или блоки (объемом < 500 мкл) больше подходят для КЭ, чем традиционные диализные камеры; диализ можно осуществить за 12 часа [79]. Для ВЭКЭ-анализа могут использоваться обе стороны диализной камеры в зависимости от того, какое соединение исследуется — с низкой или высокой молекулярной массой. Небольшие объемы (~200 мкл) можно быстро профильтровать (1-7 мин) с помощью специальных мембранных фильтров в микроцентрифуге

elektroforez-20

Рис. 2.14. Очистка пробы путем диализа и осаждения спиртом белков мочи больного протеинурией Бенс-Джонса [79].
Капилляр 50 мкм х 32 см; Е = 230 В/см; X = 214 нм; 24 °С; инжекция под давлением в течение 4 с; разделительный буфер: 0.7 г борной кислоты, 0.7 г Na3CO3, 0.5 г полиэтиленгликоля в 100 мл воды.
а — необработанная моча; б — осаждение этанолом (1 мл этанола на 200 мкл мочи при 4 °С, промывание 1 мл этанола и растворение в 200 мкл разбавленного рабочего буфера); в — диализованная в течение 4 ч моча по сравнению с водой

с ускорением 15 000 g. Оба метода применяются при ВЭКЭ- анализе для очистки мочи от белков. На рис. 2.14 представлена электрофореграмма и условия очистки пробы мочи, взятой у больного протеинурией Бенс-Джонса с использованием диализа и осаждения спиртом. Добавление концентрированного раствора высокомолекулярного соединения, например 20 %-го полиэтиленгликоля, на одной стороне диализной ячейки может использоваться для концентрации белков.

Оставить комментарий

Ваш email не будет опубликован. Поля для обязательного заполнения *

*

Подняться вверх