Главная / Здоровье / Капиллярный электрофорез 1 / Недостаточная воспроизводимость результатов

Недостаточная воспроизводимость результатов

Оцените статью

Однако при всех преимуществах КЭ имеются и проблемы. Возможно, наибольшим препятствием является недостаточная чувствительность детектирования КЭ. Несмотря на превосходную чувствительность по массе при использовании УФ-детектора КЭ имеет плохие пределы обнаружения по концентрации. Это связано с малым количеством пробы, вводимой в капилляр, и микронным диаметром капилляра, обычно определяющим длину оптического пути в УФ-детекторе. Таким образом, хотя метод УФ-поглощения обычно позволяет обнаруживать от пикомолей до фемтомолей (10-1210-15 моль) вещества, нанолитровый объем вводимой пробы ограничивает чувствительность анализа приблизительно микромольным диапазоном (10-6 моль/л). Методы, позволяющие разрешить эту проблему, рассмотрены в гл. 2. Лучше всего подходит метод стэкинга пробы (электродинамического концентрирования в капилляре) при разбавлении или депротеинизации пробы с помощью ацетонитрила. Заряженные анализируемые вещества концентрируются на одном из концов (в зависимости от заряда аналита) зоны пробы с низкой ионной силой, что приводит к повышению чувствительности.

Другая выявленная проблема — это недостаточная воспроизводимость результатов. К этой проблеме обращались в ряде исследований [3-7]; различные аспекты воспроизводимости результатов анализа рассматриваются в гл. 2. Вкратце можно сказать, что тщательное промывание капилляра, ввод достаточного количества пробы (чтобы получить необходимые площади пиков для автоматизированного интегрирования), использование внутренних стандартов позволяют получить воспроизводимость, сравнимую с воспроизводимостью ВЭЖХ. Для эффективного разделения в КЭ необходимы тщательное промывание капилляра и доведение его до состояния равновесия (кондиционирования) после каждого аналитического разделения, чтобы электрофорез следующей пробы проводился при тех же условиях (гл. 2).

Наконец, в КЭ на разделение сильно влияет матрица (неаналит- ные компоненты) пробы, в то время как в ВЭЖХ это влияние сведено к минимуму. Если матрица пробы значительно отличается от среды разделения, влияние матрицы сказывается на всех параметрах КЭ-анализа: времени миграции (идентификация), разрешении, количественном определении и сходимости результатов. Для исключения влияния матрицы можно использовать несколько приемов. Простейшие из них включают использование достаточно малого размера пробы по отношению к общему объему капилляра и подготовку стандартов в растворе с той же матрицей, которая использовалась для анализируемой пробы (гл. 2). Хотя КЭ — концептуально простой метод, теория разделения здесь отличается от теории разделения в ВЭЖХ, поэтому изучение проблем, возникающих в КЭ, и методов их решения, а также способов достижения оптимального разделения требует определенных затрат времени.

Детальное сравнение методов ВЭКЭ и ВЭЖХ. Аналитические и метрологические параметры.

Эффективность: у ВЭКЭ резкое увеличение эффективности (в 10-20 раз).
Пиковая емкость: у ВЭКЭ больше в 10-15 раз.
Скорость анализа: у ВЭКЭ выше в 10 раз.
Производительность (т.т./с): у мультиканального ВЭКЭ — выше в 100 раз.
Воспроизводимость анализа: у ВЭЖХ — лучше в 3-5 раз.
Точность анализа: у ВЭЖХ — лучше в 3-5 раз.
Предельно детектируемая концентрация: при СФ — преимущество ВЭЖХ в 20 раз (10-8 М сравнительно с 210-7 М для ВЭКЭ); при ЛИФ — преимущество ВЭКЭ в 10 раз (10-13 М сравнительно с 10-12 М для ВЭЖХ).
Селективность: по неэлектролитам и белкам — в условиях обычного анализа лучшая у ВЭЖХ; по полиэлектролитам (ДНК) — лучшая у ВЭКЭ.
Универсальность: ВЭЖХ — лучшее применение для анализа гидрофильных неэлектролитов, полимеров (эксклюзионная обра- щенно-фазная, ионообменная ВЭЖХ); ВЭКЭ — лучшее применение в анализе электролитов, полиэлектролитов, биополимеров (ионный ВЭКЭ, ЭКХ, ЭОХ, монолитная ЭОХ).
Возможность стыковки «on-line»: с масс-спектрометром — лучшая у ВЭКЭ (ВЭКЭ—электроспрей); с МАLLS (multi-angle laser-light scattering) — лучшая у ВЭЖХ, более эффективно применение масс-спектрометра в режиме «off-line».
Технические параметры.

Ввод проб: ВЭЖХ — более точный (в 10 раз), но сложный в конструктивном исполнении (высокое давление); ВЭКЭ — простой (низкое давление).
Линейная конфигурация прибора: присуща и ВЭЖХ, и ВЭКЭ.
Побудитель движения: в ВЭЖХ — давление (АР), прецизионный микронасос, значительно дороже, чем в ВЭКЭ, где — напряжение (АЕ).
Объем детектирования oV (пл, in column*): ВЭЖХ < 1.6, ВЭКЭ < 47.
Оптическая длина детектирования (мкм, in column*): ВЭЖХ — 2.8; ВЭКЭ — 24 (ВЭКЭ — высокая чувствительность, эффективное применение в чип-анализаторах).
Экономические параметры.

Возможность препаративного разделения: ВЭЖХ — микропрепаративное фракционирование, ВЭКЭ — нанофракционирование.
Цена прибора: ВЭЖХ — $ 80 тыс., ВЭКЭ — $ 25-40 тыс.
Стоимость годичной эксплуатации (% цены прибора): ВЭЖХ > 30 %, ВЭКЭ я 2 %.
Требования к квалификации оператора: выше у ВЭКЭ.
В настоящее время период бурного развития ВЭКЭ сменился его освоением в аналитической практике. Происходит быстрое внедрение этого метода в современную аналитическую химию, о чем

Оптимальные значения: N = 100 000 т.т.; время анализа t = 1 мин; k = 5).

свидетельствует значительный рост числа публикаций по ВЭКЭ. В библиографии, например, работ [8, 9] представлено более 1000 ссылок. Опубликованы и монографии по ВЭКЭ [10-12].

Оставить комментарий

Ваш email не будет опубликован. Поля для обязательного заполнения *

*

Подняться вверх