Главная / Здоровье / Капиллярный электрофорез 1 / РАЗБАВЛЕНИЕ И ПРЯМОЙ ВВОД ПРОБЫ

РАЗБАВЛЕНИЕ И ПРЯМОЙ ВВОД ПРОБЫ

Оцените статью

Одно из основных достоинств КЭ при массовом анализе — простота ввода пробы. Если исследуемое соединение имеет сильное поглощение и его концентрация высока по сравнению с концентрацией других присутствующих соединений, аналит можно обнаружить без специальной обработки пробы. Однако если концентрация аналита невелика и в пробе присутствуют нежелательные соединения в высокой концентрации, необходима очистка пробы. Из-за матричных эффектов обычно наблюдаются различия во времени миграции и высоте пиков между водорастворимыми стандартными веществами и «реальными» пробами. Ряд лекарственных средств, например теофиллин, кофеин [69] и барбитураты

[70], были успешно проанализированы методом МЭКХ с прямым вводом сыворотки. В этом случае ПАВ не только образуют мицеллы, но и помогают солюбилизировать белки. Когда эталонные вещества добавлялись непосредственно в сыворотку, полученные результаты после идентификации пиков с помощью спектрального сканирования хорошо согласовывались с результатами иммуноанализа. Ряд соединений, содержащихся в моче, например креатинин, мочевая кислота, фосфор, успешно анализировались при прямом вводе мочи без предварительной подготовки [71]. Методом ВЭКЭ анализировался ряд анионов мочи, например цитраты, оксалаты и сульфаты после соответствующего разбавления [48, 72]. Некоторые органические кислоты в пробах пищевых продуктов определялись с помощью ВЭКЭ после разбавления пробы при использовании непрямой УФ-фотометрии [67]. С использованием разбавления пробы в моче также определялся миоглобин. При этом гемоглобин добавлялся в мочу в качестве внутреннего стандарта для выявления изменений во времени удерживания, вызванных матричными эффектами [73].

Важно отметить, что разбавление не очищает пробу, а просто уменьшает ионную силу матрицы. К сожалению, при этом уменьшается также концентрация аналита в пробе и, следовательно, сигнал детектора. Чтобы обеспечить соответствие более высокой концентрации ионов в пробе, ионная сила сепарационного буфера должна быть максимально возможной, чтобы при стэкинге отношение концентраций ионов электрофоретического буфера и пробы поддерживалось приблизительно равным 10 [74]. Для анализа различных лекарств в сыворотке, например пентобарбитала [75] или иогексола [76], использовался боратный буфер (от 200 до 500 мМ). Недостаток подобных буферов заключается в том, что большая ионная сила замедляет разделение в результате уменьшения электроосмотического потока. Увеличение времени анализа может быть компенсировано использованием коротких (25 см) и узких (25 или 50 мкм) капилляров, которые также более эффективно рассеивают выделяемое джоулево тепло. Использование высоких концентраций буферных растворов приводит к увеличению числа теоретических тарелок, разрешения и допустимого объема пробы благодаря усиленному эффекту стэкинга. Использование буферов с высокой ионной силой вызывает уменьшение «хвостов» пиков из- за уменьшения радиальных градиентов рН в капилляре [77]. Использование буферов большой ионной силы и узких капилляров обеспечивает хорошее разделение белков при небольшой их адсорбции или ее отсутствии и необходимую фокусировку пробы

[78].

Оставить комментарий

Ваш email не будет опубликован. Поля для обязательного заполнения *

*

Подняться вверх