Главная / Здоровье / Капиллярный электрофорез 2 / ДЕТЕКТИРОВАНИЕ ПО ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ

ДЕТЕКТИРОВАНИЕ ПО ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ

Оцените статью

Детектирование по флуоресценции — самый чувствительный метод детектирования в ВЭКЭ. Достигалась чувствительность детектирования на уровне одной молекулы в случае применения ячейки с проточной жидкостной оболочкой [40-42]. При использовании КЭ в режиме «on-line» разделение ограничено и максимальной скоростью потока, и временем наблюдения. Пределы обнаружения с использованием лазеров составляют менее 10-13 М [43], т. е. менее 10 молекул по массе [44]. В отличие от метода поглощения в УФ-видимой области спектра, предельная чувствительность при использовании флуоресценции не слишком зависит от длины детектирования, и лазерные системы могут уменьшаться до размеров капилляров. В методе флуоресценции молекулы анализируемого вещества поглощают фотон, по возвращении в основное состояние возбужденная молекула может испустить фотон. Наиболее важными параметрами, определяющими аналитическую пригодность флуорофора, являются поглощающая способность, квантовый выход флуоресценции и фотостабильность. Более высокая поглощающая способность означает, что при данной интенсивности облучения вероятность возбуждения молекулы будет выше. Квантовый выход флуоресценции (доля возбужденных молекул, испускающих фотоны) для чувствительных флуорофоров может приближаться к 1, т. е. почти на каждый поглощенный фотон приходится один испускаемый фотон. Фотостабильность определяют как среднее число циклов возбуждения—испускания, которое может претерпеть молекула до разрушения. Для лучших флуорофоров на основе родамина это несколько сотен тысяч циклов.

Хотя интенсивность спектрального фона обычно невелика, существует несколько источников фона, которые ограничивают пределы детектирования при измерении флуоресценции. Тремя наиболее значительными источниками фона являются:

релеевское рассеянное излучение (с длиной волны возбуждения), можно убрать с помощью соответствующих фильтров или монохр оматор ов;
комбинационное рассеяние при малых концентрациях флуо- рофора;
люминесценция стенок капилляра и примесей среды разделения.
Базовая система детектирования по флуоресценции включает источник возбуждения, оптику для фокусировки излучения источника возбуждения в капилляр или другую ячейку с пробой, оптику для собирания выходного излучения и систему детектирования.

Оставить комментарий

Ваш email не будет опубликован. Поля для обязательного заполнения *

*

Подняться вверх