Главная / Здоровье / Капиллярный электрофорез 2 / ДЕТЕКТИРОВАНИЕ ПО ПОГЛОЩЕНИЮ

ДЕТЕКТИРОВАНИЕ ПО ПОГЛОЩЕНИЮ

Оцените статью

Детектирование с использованием УФ-поглощения до сих пор является наиболее распространенным при КЭ-разделениях, т. к. большинство анализируемых соединений поглощают излучение в той или иной области этого диапазона. Чаще всего детектирование по поглощению не требует химической модификации пробы перед анализом и поэтому является чрезвычайно удобным способом детектирования. Функциональная блок-схема детектора по поглощению для КЭ приведена на рис. 3.1.

УФ-излучение от дейтериевой лампы с помощью фокусирующей оптики или оптических фильтров через апертурную диафрагму направляется в область детектирования капилляра из кварцевого стекла, где удалено полиамидное покрытие. Выбор длины волны достигается либо с помощью оптических фильтров, либо с помощью дифракционной решетки. Передаваемое излучение направляется на фотодетектор, обычно представляющий собой фотодиод или линейку фотодиодов. Предусилитель детектора преобразует фототок в напряжение и обеспечивает надлежащее усиление и электронную фильтрацию. Аналого-цифровой преобразователь (АЦП) преобразует выходной сигнал в цифровую форму в системах сбора данных персонального компьютера. Часто используется еще один детектор в качестве опорного канала сравнения для исключения влияния дрейфа источника. Сигнал поглощения получается из отношения интенсивности фонового излучения, когда капилляр заполнен только средой разделения, к интенсивности передаваемого излучения, когда проба мигрирует через область детектирования. Значение фонового пропускания измеряется в начале анализа, когда в объеме детектирования проба отсутствует, и эта величина непрерывно сравнивается со значениями, полученными
во время анализа. Степень поглощения зависит от числа взаимодействий между фотонами и поглощающими молекулами. Когда поглощающая молекула поглощает фотон и переходит в возбужденное электронное состояние, наблюдается уменьшение интенсивности передаваемого света, попадающего на фотодетектор. Число фотон-молекулярных взаимодействий является функцией концентрации пробы, длины детектирования и интенсивности облучения. Роль ряда зависящих от конструкции параметров при детектировании по поглощению отражена в законе Ламберта—Бера: Log I0 / I = A = sbc, (3.2)

где I0 — интенсивность излучения, падающего на пробу; I — интенсивность излучения, выходящего из пробы; А — измеренное поглощение пробы (е.о.п.); s — коэффициент молекулярного поглощения пробы на выбранной длине волны; b — длина оптического пути; с — молярная концентрация пробы в объеме детектирования (моль/л).

Основной недостаток детектирования по поглощению в ВЭКЭ — это относительно плохие значения минимальных детектируемых концентраций (МДК), которые обычно лежат в 10-6 М диапазоне. Много усилий было затрачено на оптимизацию детектирования по поглощению путем снижения минимальной детектируемой концентрации. В основном адаптируют подходы, заимствованные из микроколоночной жидкостной хроматографии, к узким капиллярам из кварцевого стекла, используемым при КЭ-разделениях [1012]. Существуют следующие подходы к улучшению характеристик детектора.

Оставить комментарий

Ваш email не будет опубликован. Поля для обязательного заполнения *

*

Подняться вверх