Фокусировка.

Оцените статью

Участок, освещенный излучением источника в плоскости капилляра, часто на несколько порядков больше площади отверстия капилляра, которое определяет размер светового пятна (рис. 3.3, а). В результате только небольшая доля энергии используемого источника проходит через ячейку детектора, а остальное излучение блокируется диафрагмой. Можно использовать сферическую «шаровую линзу» для увеличения выходного светового потока путем фокусирования излучения источника до размера, сравнимого с внутренним сечением капилляра (рис. 3.3, б) [24]. Дальнейшая фокусировка стенками капилляра уменьшает пятно до размера меньше внутреннего диаметра капилляра, и все лучи проходят через канал разделения. Это обеспечивает 100-кратное уменьшение шума детектора по сравнению со схемой, когда диафрагма устанавливается на детекторе. Также в схеме детектирования по УФ-поглощению используется волоконная оптика [1, 25-27]. Волоконно-оптический интерфейс привлекателен, т. к. в нем заложена возможность дистанционного размещения источника

kapilar-3
Рис. 3.3. Оптические схемы при детектировании.

а — размер светового пятна определяется диафрагмой; б — использование «шаровой линзы»

излучения и детектора, простой замены капилляра и облучения нескольких капилляров от одного источника света.

Увеличение выходной мощности источника излучения. Ламповые источники выбираются, исходя из длины волны, интенсивности и стабильности. При одном и том же уровне стабильности источник излучения большей интенсивности позволит снизить шум и тем самым улучшить пределы детектирования. Для увеличения интенсивности источника можно использовать лазерный источник излучения. Помимо высокой интенсивности, излучение лазера эффективно фокусируется в капилляр. Однако лазер отличается высоким уровнем шума, а стабильность его лежит в диапазоне 1 %. Сообщалось о детекторе поглощения для КЭ с двулучевым лазером и остроумной электронной схемой подавления шума, ограничивающей дробовой шум при облучении лазером [28-30]. При использовании этого метода получен предел детектирования по концентрации 210-8 М для малахитовой зелени при использовании источника на HeNe-лазере. Это означает 25-кратное улучшение пределов детектирования по сравнению с серийно выпускаемыми детекторами по поглощению для КЭ.

Подбор длины детектирования. С точки зрения снижения шума детектора для достижения максимального выходного светового потока должна выбираться максимально допустимая длина детектирования (о2 = 0.1о2мин.пика) для данного применения. При разделениях, связанных с секвенированием ДНК с использованием капиллярного гель-электрофореза, имеет место высокое разрешение, число теоретических тарелок может достигать нескольких миллионов. Поэтому длина детектирования должна ограничиваться во избежание потери разрешения из-за дисперсии детектора. С другой стороны, при разделении разнородных смесей белков для увеличения оптической эффективности и снижения уровня шума детектора можно использовать относительно большую длину детектирования. В системе ВЭКЭ общего применения желательно иметь изменяемую длину детектирования.

Оставить комментарий

Ваш email не будет опубликован. Поля для обязательного заполнения *

*

Подняться вверх