Главная / Здоровье / Капиллярный электрофорез 2 / МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Оцените статью

Современные терапевтические средства представляют собой структурно разнородную группу. Будучи введены один раз в организм, они могут, претерпевая ряд метаболических переходов, превратиться в вещества, влияющие на терапевтические и токсические свойства лекарства [34]. Поэтому важно понимать химическую и физическую трансформацию исходного лекарства, физиологическую реактивность его и его метаболитов. Среди этих процессов — абсорбция, распространение, метаболическая трансформация и, наконец, выделение исходного соединения и его метаболитов. Метаболическая судьба лекарства приводит к образованию трех видов продуктов [35]. Метаболиты фазы I обычно более полярны, что способствует их дальнейшим превращениям; метаболиты фазы II получаются путем превращения модифицированных продуктов фазы I в водорастворимые соединения, обеспечивающие выделение метаболитов из организма; фаза III включает продукты разложения под воздействием кишечной микрофлоры [36].

Наиболее распространенный метод идентификации лекарств и их метаболитов — это ВЭЖХ, где идентификация неизвестных соединений осуществляется на основе сравнения времен удерживания и УФ-спектров с соответствующими данными для синтезированных эталонов. Этот подход имеет два основных недостатка: 1) метаболизм фазы I часто приводит к небольшой структурной модификации лекарств с созданием метаболитов, трудно отделяемых от исходного соединения и/или друг от друга; 2) метаболиты фазы II обычно полярны и нестабильны, что может помешать применению для их анализа классических методов ВЭЖХ. Другие недостатки — это большие затраты времени на разработку методик ВЭЖХ и отсутствие структурной информации о разделенных продуктах. Отсутствие структурной информации преодолевается путем использования масс-спектрометрии [37, 38] или использованием комбинации ВЭЖХ-МС [38-41].

Другой метод идентификации лекарственных средств — иммуноанализ, в котором исходное лекарство и его метаболиты идентифицируются и количественно определяются путем связывания со специфичными антителами. Хотя этот метод чрезвычайно чувствителен (обычно уровень чувствительности достигает пМ (нг/л)) благодаря использованию методов детектирования на основе радиометок или ферментов, для каждого соединения необходимо создавать антитела. Отсутствие антител для многих представляющих интерес соединений помешало использованию этого метода для анализа лекарств или их метаболитов. Другая проблема иммуноанализа — перекрестная реактивность лекарств со сходной структурой. Это особенно проявляется в случае родственных соединений и их метаболитов. КЭ имеет ряд преимуществ благодаря высокой эффективности разделения структурно схожих соединений, малому времени анализа и сравнительной простоте разработки методик. Этот метод также обеспечивает возможность одновременного определения метаболитов фазы I и фазы II, а также возможность определения новых и/или сравнительно короткоживущих метаболитов. Если структурная идентификация отсутствует, как в ВЭЖХ, можно использовать сочетание КЭ-МС, как это было сделано в случае сульфонамидных препаратов [17] и галопе- ридола [42].

Использование КЭ для анализа низкомолекулярных органических соединений обычно с массой менее 1000 Да было ограниченным [43, 44] и включало анализ промышленно выпускаемых соединений методом МЭКХ. Анализ литературы показывает, что КЭ хорошо использовать для одновременного определения исходного соединения и его метаболитов. В большинстве случаев исследователи анализировали биологические жидкости на присутствие исходных соединений и основных метаболитов, редко используя больше одной точки измерения на оси времени. В одной из ранних работ выделяли витамины В2 в крови [45] и метаболиты В6 в моче [46], используя 10 мМ фосфат, 6 мМ тетраборатный буфер с 50 мМ ДСН. Показаны возможности КЭ в определении уровней содержания лекарств в плазме крови [29]. Для определения метотрексата и его метаболитов в разделительном буфере, содержащем 5 мМ MES, 5 мМ Трис и 1 мМ хлористого натрия, pH = 6.7, необходимы автономная твердофазная экстракция и этап концентрирования. Используя КЭ с ЛИФ-детектором, можно определять концентрации до 10-10-10-9М. Фосфомицин, противомикробный препарат, определялся в сыворотке после ацетонитрильного осаждения белков [47]. Разделение в боратном буфере с непрямым СФ- детектированием на длине волны 254 нм обеспечивало чувствительность около 10 мкг/мл. Основной метаболит кумарина 7-гидроксикумарин и его исходное соединение определялись в моче и сыворотке после экстракции [48]. КЭ 7-гидроксикумарина в 25 М фосфатном буфере, pH = 7.5, занимал мало времени (< 2 мин).

Исследованы метаболиты флуразепама, а также ряд сульфон- амидов и бензодиазепинов [17]. Определение основного метаболита N-1-годроксиэтилфлуразепама в моче осуществлялось после ферментативной деглюкуронидации и жидкостной экстракции с разделением в 0.2 мМ ацетат-аммонийном буфере с pH =1.3 с TФУК и 15 % (по весу) метанолом. УФ-детектирование на длине волны 254 нм позволяло определять эти продукты в концентрации 0.5 мкг/мл, сравнимой с пределами детектирования ВЭЖХ- анализа. Guzman и др. [49] использовали этап предварительной концентрации при идентификации мочевой кислоты и метамфета- мина в моче. С помощью МЭКХ анализировалось несколько диуретиков за время, меньшее 10 мин [3]. Напроксен, противовоспалительное средство, анализировался в сыворотке после экстракции в растворитель [13]. При этом УФ-детектирование обеспечивало чувствительность по концентрации в интервале 0.525 мкг/мл, а ЛИФ-детектирование — определение концентраций от 0.01 до 0.5 мкг/мл. Никотиновая кислота, использовавшаяся для лечения гиперлипидемии, определялась методом КЗЭ с детектированием на длине волны 254 нм после экстракции сыворотки в растворитель при относительном среднеквадратичном отклонении (ОСО) 7 % [50]. Можно избежать подготовки пробы при определении аспоксициллина с помощью МЭКХ, используя прямой ввод плазмы [51]. Подготовка пробы была не нужна благодаря присутствию ДСН в буфере, который минимизировал адсорбцию белков на стенках капилляра. Фамотидин анализировался путем прямого ввода мочи при использовании электрофоретического буфера, содержащего аминокапроновую кислоту, pH = 4.5, с добавками дек- страна, полиэтиленоксида и метанола [52]. Антипирин, маркер окислительной функции печени [53, 54], можно было обнаружить в слюне с помощью экспресс-анализа (<4 мин) методом МЭКХ без предварительной подготовки пробы с использованием боратного буфера, pH = 9.6, содержащего ДСН. Содержание у-оризанола и его метаболита — феруловой кислоты анализировалось в плазме крови [55]. Описаны условия разделения 5-флуороцила и его метаболитов [56]. Исследовано разложение пенцикловира, противовирусного соединения, в пульпе для усовершенствования процесса

ВЭЖХ, который был слишком длителен (22 мин) для кинетического исследования реакции (t1/2 < 2 ч) [57]. Применение метода КЗЭ в фосфатном буфере при pH = 7.0 сократило время анализа до 7 мин, что позволило легко исследовать процессы биоповреждения.

Оставить комментарий

Ваш email не будет опубликован. Поля для обязательного заполнения *

*

Подняться вверх