Главная / Здоровье / Капиллярный электрофорез 2 / ОПТИЧЕСКОЕ ДЕТЕКТИРОВАНИЯ

ОПТИЧЕСКОЕ ДЕТЕКТИРОВАНИЯ

Оцените статью

Хемилюминесценция. Хемилюминесценция имеет место, когда в результате химической реакции появляется электронно-

kapilar-9

Рис. 3.9. Внутриколоночная дериватизация с использованием тройникового соединения [92].

Дериватизационный реагент поступает под действием силы тяжести по двум боковым каналам, а меченое люминофором анализируемое вещество детектируется в капилляре разделения после реакционного объема

возбужденная частица, которая испускает свет при возвращении в основное состояние. Сравнительно небольшое количество реакций создают хемилюминесценцию, поэтому широкое применение хемилюминесцентных методов ограничено из-за необходимости дериватизации. Хемилюминесцентная часть присоединяется к дериватизирующим группам, таким как изотиоцинат или суксини- мидиловый эфир, и реагирует с анализируемыми соединениями. Этот метод прост и имеет высокую чувствительность. Приборное обеспечение хемилюминесценции состоит из капилляра, элемента сбора света (например, параболического зеркала) и детектора. Поскольку единственным источником излучения здесь является реакция, часто никакого устройства фильтрации длины волны не требуется. Из-за отсутствия селектора длин волн может быть достигнута более высокая эффективность светосообщающей оптики. Однако важно помнить, что хороший флуорофор может поглощать и испускать фотоны тысячи раз до своего разрушения, в то время как в большинстве хемилюминесцентных реакций анализируемое вещество может быть израсходовано уже за один цикл анализа. Таким образом, вопрос состоит в том, что легче — обнаружить один фотон, испущенный в хемилюминесцентном эксперименте при низком уровне фона, или тысячу фотонов, испущенных во флуоресцентном эксперименте, но в присутствии значительного фона. Первыми публикациями по хемилюминесцентному детектированию в КЭ были работы [107, 108]. При разделении люминола и изолюминола [109] и ряда акридиниевых эфиров [110] удалось добиться наномолярной чувствительности. Для улучшения эффективности разделения и пределов детектирования применяли систему на основе ячейки с проточной оболочкой для аминокислот на основе изолюминол-тиокарбамильных производных. Для дерива- тизированного валина предел детектирования составлял 500 амолей, а для изолюминола — 40 амолей [111]. В настоящее время почти все широко используемые хемилюминесцентные реакции были применены в ВЭКЭ. Важным реагентом является трис(2,2-бипиридил)рутений (II), или Ru(6n)3+ [112, 113]. Этот реактив имеет сравнительно высокий квантовый выход хемилюминесценции и может много раз регенерироваться. Недостатком многих хемилюминесцентных методик является необходимость непрерывной подачи реагента в зону детектирования, т. к. хемилюминесцентные реактивы расходуются. Сравнительно полный обзор хемилюминесцентного детектирования в КЭ дается в работе [114].

Оставить комментарий

Ваш email не будет опубликован. Поля для обязательного заполнения *

*

Подняться вверх