Главная / Здоровье / Капиллярный электрофорез 2 / ПОВЫШЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ

ПОВЫШЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ

Оцените статью

Небольшие объемы пробы в ВЭКЭ означают снижение предела обнаружения по концентрации. Обычно это не является проблемой при анализе лекарственных веществ, когда количество пробы анализируемого вещества можно легко регулировать. Используемые обычно в КЭ буферные растворы (фосфатные, боратные или фос- фатно-боратные) имеют минимальные коэффициенты фонового поглощения, что позволяет использовать малые длины волн УФ- излучения, например 185-205 нм, где многие соединения дают значительно более интенсивный сигнал, чем при больших длинах волн, обычно применяемых в ВЭЖХ. Использование меньших длин волн обеспечивает прямое определение содержания лекарственных средств с очень низкой поглощающей способностью, например сахаров и сахароподобных лекарственных средств, таких как аминогликозидные антибиотики. Уменьшение длины волны детектирования полезно для следового анализа примесей (< 0.1 %). Предел обнаружения в методе ВЭЖХ, разрешенном к использованию при внедрении новых лекарств, составляет 0.1 % от содержания основного компонента. Однако при клинических анализах, анализе остатков пестицидов и контроле окружающей среды должны выполняться некоторые подготовительные операции, например экстракция и концентрация. В КЭ в последнее время широко исследуются два метода: сочетание КЭ с масс-спектрометрией (КЭ-МС) и концентрирование пробы (стэкинг).

а. Сочетание капиллярного электрофореза с масс-спектрометрией (КЭ-МС). Сочетание КЗЭ и масс-спектрометрии с электроспрей-ионизацией (КЗЭ-ЭСИ-МС) широко применяется с различными режимами КЭ и МС. В этих КЭ-МС-режимах обычно используется жидкостная оболочка для получения стабильного электрораспыления. Метод МЭКХ, использующий мицеллярные растворы электрически нейтральных веществ сравнительно высокой концентрации, представляет собой еще один вид КЭ, часто используемый в биологической и фармацевтической областях. Однако соединение МЭКХ с МС «on-line» затруднительно из-за присутствия относительно высоких концентраций нелетучих ПАВ. Это

приводит к загрязнению ионного источника, низким эффективностям ионизации и потере чувствительности. Для преодоления этого использовались различные стратегии. Одна из них заключается в использовании ПАВ большой молекулярной массы в качестве псевдонеподвижной фазы, что незначительно снижает эффективность ионизации. Успешно применялись для МЭКХ-ЭСИ-МС натриевые соли сополимеров бутил-акрилат-бутил-метакрилат- метакриловой кислоты [17]. Использовался метод частичного заполнения капилляра раствором электролита, содержащим мицеллы [18]. Для комбинации МЭКХ-МС вместо электроспрей-ионизации (ЭСИ) использовался интерфейс с химической ионизацией при атмосферном давлении (ХИАД). Показано, что на ХИАД меньше, чем на ЭСИ, влияет высокая концентрация солей электролита. Недавно в КЭ-МС был применен времяпролетный масс-спектрометр (ВП-МС) [19]. С его помощью анализировались пептиды и белки. В фармацевтическом анализе успешно использовались КЭ-МС методики энантиомерного разделения [20] с использованием в качестве хиральных селекторов авидина, ванкомицина, производных циклодекстринов и т. д. Исследовались рацематы ибупрофена, ке- топрофена, варфарена, этилефрина, камфорасульфоновой кислоты, напроксена, карпрофена, тербуталина, кетамина, пропанола и т. д. КЭ-МС использовалась для анализа гербицидов [18, 21], ПАВ [22] и заряженных производных циклодекстринов [23], шести основных лекарств в сиропе от кашля, смеси алкил-сульфонатов и пищевых красителей [24], тетрамина в морских моллюсках липарис [25]. Пределы обнаружения на уровне нг/мл были достигнуты при определении этилендиаминтетрауксусной кислоты в плазме крови человека, моче [26] и тетрамине [27]. Опубликованы обзоры по КЭ-МС [27, 28]. Систематизированы методы идентификации и детектирования путем «on-line» сочетания КЭ с другими методами (включая КЭ-МС) [29].

б. Концентрирование пробы (стэкинг). Для компенсации низкой чувствительности КЭ используются различные методы концентрации пробы [30]. Проба концентрируется на границе раздела области слабого (разделяющий раствор с высокой проводимостью) и сильного (разделяющий раствор с низкой проводимостью или зона пробы) электрических полей внутри капилляра. Стэкинг связан с увеличением электрофоретической скорости компонентов пробы. Этот метод не может быть применен в МЭКХ напрямую, поскольку электрически нейтральные аналиты не обладают электрофоретической скоростью. Однако эти электрически нейтральные вещества приобретают заметный заряд при растворении в мицеллах и эффективно накапливаются [22, 31]. Как видно из рис. 4.1, этим путем достигнуто более чем 100-кратное увеличение сигнала детектора для стероидов [31]. Другой подход — это развертка, которая обеспечивает почти неограниченные возможности повышения чувствительности при определении концентрации

kapilar-16

Рис. 4.1. Стекинг электрически нейтральных лекарственных веществ при МЭКХ-анализе с использованием обратной миграции мицелл и водяной пробки [31].

а — без стекинга. Ввод раствора пробы в течение 2 с. Раствор пробы готовится с мицеллярной матрицей малой проводимости при низком pH. б — со стекингом. Ввод воды в течение 120 с, ввод раствора пробы в течение 240 с. 1 — тестостерон, 2 — гидрокортизон, 3 — кортизон

аналитов, обладающих сродством к псевдонеподвижной фазе. Здесь достигнуто 5000-кратное повышение чувствительности [32]. Сообщается об успешном использовании микроэмульсии и Р- циклодекстрина с одним сульфированным изомером для исследований с накоплением пробы и разверткой [33]. Разработан простой способ концентрации пробы с большой ионной силой для получения высокой степени электрофокусирования с 7-кратным повышением чувствительности анализа катехоламинов путем локального pH-титрования буферного раствора [34].

Оставить комментарий

Ваш email не будет опубликован. Поля для обязательного заполнения *

*

Подняться вверх