Главная / Здоровье / Капиллярный электрофорез 2 / ПРОТИВОЭПИЛЕПТИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА

ПРОТИВОЭПИЛЕПТИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА

Оцените статью

Среди лекарств, которые требуют МЛП при лечении больного, можно назвать противоэпилептические средства, в особенности фенобарбиталы и фенитоин. Здесь важность МЛП подчеркивается тем, что число эпилептических припадков, наблюдавшихся у принимавших эти противоэпилептические средства пациентов, уменьшалось, когда их уровень в организме был введен в терапевтические рамки. Для анализа противоэпилептических средств использовался как КЗЭ, так и МЭКХ. МЭКХ использовали для контроля нескольких противоэпилептических лекарств, в том числе этосуксимида, фенитоина, примидона, вальпройной кислоты, фенобарбитала и карбамазепина [1]. Для этого лекарства экстрагировались из плазмы крови с помощью этилацетата и разделялись в 25 мМ фосфатном буфере, pH = 8.0, содержащем 50 мМ ДСН, за 14 мин. Барбитураты, в том числе фенобарбитал, пентобарбитал, амобарбитал и буталбитал, определяли в сыворотке крови и моче методом МЭКХ в буферном растворе 9 мМ Na2B4O2, 15 мМ NaH2PO4 и 50 мМ ДСН при pH = 7.8 [2]. В то время как детектирование в сыворотке крови можно было осуществлять при прямом вводе пробы, определение содержания лекарств в моче требовало экстракции. Противоэпилептические лекарства разделяли методом МЭКХ, используя 30 мМ боратный буфер, pH = 9.3, содержащий 30 мМ ДСН и 30 % ацетонитрила [3]. С использованием твердофазной экстракции пробы разделение требовало около 15 мин. КЗЭ использовался для определения пентобарбитала в сыворотке крови после ацетонитрильной депротеинации в 300 мМ боратном буфере, pH = 8.5 [4]. Анализ занимал 5 мин.

Для новых противоэпилептических лекарств (габапентин, фел- бамат, ламотригин) нет готовых иммунотестов, и хорошей альтернативой являются анализы на основе КЗЭ. Габапентин (нейротин) синтезирован как структурный аналог нейромедиатора ГАМК (гамма-аминомасляной кислоты) и других аминокислот. Поскольку это лекарство не содержит хорошего хромофора (для поглощения УФ-излучения), требовалась его дериватизация с помощью флуорескамина для УФ-детектирования. Этот процесс включался в процедуру депротеинации для обеспечения простого одноступенчатого процесса анализа (депротеинации, дериватизации). КЭ- анализ на длине волны 200 нм выполнялся за 12 мин с чувствительностью 1 мкг/мл [5]. Можно обнаруживать фелбамат методом МЭКХ путем прямого ввода сыворотки после добавления внутреннего стандарта [6]. Анализ занимает мало времени (~5 мин) по сравнению с ВЭЖХ (~12 мин) с чувствительностью 5 мкг/мл. Одна из основных проблем в МЭКХ — поддержание времени миграции белков сыворотки, значительно отличающегося от времени миграции лекарства, путем использования буферного раствора, оптимизированного по ионной силе и концентрации ДСН. Найдено, что время миграции фенобарбитала немного больше, чем фелбамата. Поскольку ламотригин является основанием, его время миграции меньше, и он легко анализируется в водных растворах, но не в сыворотке, т. к. время миграции белков оказывается таким же.
Поэтому разделению должна предшествовать депротеинация с последующим добавлением уксусной кислоты, понижающей pH до значений ниже pKa данного соединения (рис. 5.1) [7]. Время анализа методом КЭ было вдвое меньше, чем при использовании ВЭЖХ. Обработка сыворотки Р-глюкуронидазой приводило к увеличению высоты пиков на 24 %, что указывает на то, что сыворотка крови пациентов, принимающих ламотригин, содержит значительное количество конъюгированного метаболита. Сыворотка (50 мкл) смешивалась с 100 мкл ацетонитрила, содержавшего 40 мг/л триамина в качестве внутреннего стандарта. Смесь центрифугировалась 30 с (при ускорении 14 000 g), и отделившийся слой смешивался со 100 мкл уксусной кислоты (0.9 моль/л) и вводился в капилляр (25 с под давлением 3.5 кПа). Капилляр — 50 мкм х 47 см, эффективная длина 40 см; материал — кремний без покрытия. Буфер — 130 мМ ацетата натрия, рН 4.8. Условия разделения — 10 кВ, Т = 24 °С, X = 210 нм.

Оставить комментарий

Ваш email не будет опубликован. Поля для обязательного заполнения *

*

Подняться вверх