Главная / Здоровье / Капиллярный электрофорез 2 / ПРЯМОЕ И НЕПРЯМОЕ ДЕТЕКТИРОВАНИЕ

ПРЯМОЕ И НЕПРЯМОЕ ДЕТЕКТИРОВАНИЕ

Оцените статью

Метод детектирования выбирается, исходя из физических и химических свойств анализируемого вещества и требований решаемой задачи. Так, используют принцип поглощения УФ-излучения для сильно поглощающих молекул или флуоресценции для легко дериватизируемых веществ. Однако можно применить непрямое детектирование к веществам, которые не обладают необходимыми физическими и химическими свойствами, по действию, которое анализируемое вещество оказывает на другую более легко обнаруживаемую молекулу. Включив легко обнаруживаемую (детектируемую) молекулу в состав разделяющей среды и контролируя воздействие анализируемого вещества на сигнал, формируемый этой другой молекулой, можно косвенно наблюдать присутствие анализируемого вещества. К настоящему времени описано применение непрямого детектирования в ВЭКЭ [3-9]. Для достижения наилучших характеристик (наиболее низких пределов детектирования) при непрямом детектировании требуются хорошо описанный механизм вытеснения, большое передаточное отношение (ПО) и очень стабильный фон. Передаточное отношение определяется как число формирующих сигнал молекул, вытесненных молекулой анализируемого вещества. Замещение заряда происходит, например, когда анионная формирующая сигнал молекула замещается анионной молекулой анализируемого вещества. При уменьшении концентрации анализируемого вещества ищут уменьшение небольшой разницы между двумя относительно большими сигналами. Этими сигналами являются фоновый сигнал и фоновый сигнал минус сигнал, возникающий при замещении формирующих сигнал молекул. Поэтому необходим исключительно стабильный фон, т.е. очень стабильные ламповые источники света. Однако применение непрямого детектирования по флуоресценции с лазерными источниками ограничено из-за шумового характера лазеров, из-за чего непрямое детектирование по поглощению на практике характеризуется более низкими пределами детектирования по концентрации, чем непрямое детектирование по флуоресценции. Чем стабильнее фон (больше ПО), тем ниже предел детектирования. Кроме того, чем эффективнее процесс переноса, тем ниже предел детектирования. Динамический диапазон или предел детектирования можно оптимизировать путем варьирования концентрации молекул, формирующих сигнал.

Непрямое детектирование лучше всего подходит для специализированных систем, ориентированных на определенное применение, в которых каждый из решающих параметров может быть оптимизирован. В непрямом методе УФ-поглощения чувствительность и предел детектирования могут быть по-настоящему оптимизированы путем тщательного подбора хромофора, формирующего сигнал для детектирования.

Оставить комментарий

Ваш email не будет опубликован. Поля для обязательного заполнения *

*

Подняться вверх