Главная / Здоровье / Капиллярный электрофорез 2 / Различные оптические схемы для капиллярного электрофореза

Различные оптические схемы для капиллярного электрофореза

Оцените статью

В первой лазерной системе флуоресцентного детектирования для ВЭКЭ осуществлялась фокусировка излучения HeCd-лазера с длиной волны 325 нм в световолокно, которое использовалось для облучения участка капилляра (рис. 3.5, а) [50]. Эта ЛИФ-система имела пределы детектирования ~200 амоль (0.1 мкМ) для дансилированных аминокислот. Поскольку ряд важных биомолекул флуоресцируют при возбуждении в УФ-области, лазерное возбуждение в УФ-области является привлекательной альтернативой дериватизации этих соединений

kapilar-5

Рис. 3.5. Различные оптические схемы для капиллярного электрофореза с детектором лазерно-индуцированной флуоресценции.

ОВСВ — оптическое волокно системы возбуждения; СОВ — собирающее оптическое волокно; ВИП — высоковольтный источник питания; КК — капиллярная колонка; ККПЖ — кварцевая камера для потока жидкости; ОТД — окуляр с точечной диафрагмой; ВЛИ — ввод лазерного излучения; ОМ — объектив микроскопа; АД — апертурная диафрагма; ПО — параболический отражатель

с использованием меток, флуоресцирующих при возбуждении видимым светом. Известно использование УФ-возбуждения для кон- альбумина с помощью аргон-ионного лазера с удвоением частоты на длине волны 257 нм [51]. Пределы детектирования белков были улучшены при использовании аргон-ионного лазера с длиной волны 275 нм (такая линия получается только от лазеров с напряжением 440 В) [52]. Для этой длины волны пределы детектирования для

триптофана ~10-9 M и для белков, содержащих большое количество молекул триптофана, — до 10-10 М. Криптоловый лазер с удвоением частоты на длине волны 284 нм дает пределы детектирования для триптофана ~10-10 М [53, 54]. Пределы детектирования при УФ-возбуждении хуже, чем при возбуждении видимым светом с использованием флуорофоров, например родамина, благодаря фотостабильности большинства УФ-флуорофоров. Однако исключение необходимости дериватизации на следовом уровне позволяет значительно упростить аналитическую методику и поэтому является большим преимуществом. Интересно использование возбуждения в ближайшей ИК-области спектра, т. к. при этом достигаются превосходные пределы детектирования и имеются миниатюрные и недорогие диодные лазеры и детекторы на лавинных фотодиодах. В ближайшей ИК-области спектральный фон очень мал (очень мало материалов флуоресцируют в этой области), а 1/Л.4-зависимость комбинационного рассеяния уменьшает его вклад в фон. Ряд флуорофоров ближней ИК-области был разработан для секвенирования ДНК с использованием разнообразных цианино- вых красителей [55-57]. При этом пределы детектирования лежат в начале зептомольного диапазона [57].

 

Оставить комментарий

Ваш email не будет опубликован. Поля для обязательного заполнения *

*

Подняться вверх