Главная / Здоровье / Капиллярный электрофорез 2 / Увеличение длины поглощения

Увеличение длины поглощения

Оцените статью

Ограниченная чувствительность детектирования по УФ-поглощению ожидаема, поскольку оптическая длина пути обычно ограничена внутренним диаметром капилляра. Внутренний диаметр капилляров колеблется от 2 до 200 мкм, самый распространенный размер 25-100 мкм. Сильное уменьшение эффективности разделения часто наблюдается выше 100 мкм из-за резистивного нагрева, а МДК значительно ухудшается для диаметров меньше 25 мкм. Наиболее распространенный подход к детектированию по поглощению базируется на трансколоночном облучении, когда пространственно узкая полоса света с выбранной длиной волны пропускается через стенки капилляра в направлении, перпендикулярном оси капилляра (рис. 3.2, а). Так как капилляр цилиндрический, средняя длина поглощения, используемая при измерениях поглощения в трансколоночном методе, несколько меньше внутреннего диаметра капилляра. Средняя эффективная длина поглощения в трансколоночной схеме может быть приближенно выражена следующим образом [13]:

b = (ж х -диаметр колонки)/4. (3.3)

Для капилляра с внутренним диаметром 50 мкм средняя эффективная длина поглощения будет 39 мкм, и величина поглощения будет составлять 1/250 величины, измеряемой спектрофотометром при использовании стандартной 1 см кюветы. Можно увеличить длину поглощения в пробе до 1 мм путем использования каналов прямоугольного сечения [14]. В этом случае применяется трансколоночная схема, в которой источник излучает вдоль главной оси капилляра прямоугольного сечения, поглощение измеряется на длине волны 310 нм (рис. 3.2, б). Можно предположить, что оптимальное соотношение между длиной поглощения и оптической эффективностью будет наблюдаться при увеличении коэффициента формы этих прямоугольных капилляров. Одно увеличение длины поглощения без изменения объема детектирования обычно не приводит к увеличению отношения сигнал/шум, несмотря на увеличение поглощения [15, 16]. Основная причина этого заключается в том, что большие значения поглощения больше компенсируются увеличением шума детектора из-за уменьшения количества света, пропускаемого более узкой ячейкой (ограничение дробовым шумом). Tsuda и др. [14] увеличивали как длину поглощения, так и объем детектирования, поддерживая неизменной геометрию канала разделения, обеспечивающую эффективное рассеяние тепла

kapilar-2
Рис. 3.2. Способы увеличения длины поглощения в капиллярном электрофорезе. а— стандартная «трансколоночная конфигурация» (поперечное облучение); б — капилляр прямоугольного сечения; в — z-образная проточная ячейка; г — продольное облучение; д — ячейка с многократным отражением

(прямоугольная геометрия 50 х 1000 мкм). Это позволило увеличить объем ячейки более чем в 25 раз на единицу длины, а длину поглощения в 20 раз по сравнению с традиционным цилиндрическим капилляром с внутренним диаметром 50 мкм. При 20- кратном увеличении длины поглощения добились 15-кратного улучшения МДК до величин порядка 10-7 М.

Оставить комментарий

Ваш email не будет опубликован. Поля для обязательного заполнения *

*

Подняться вверх