Ячейка детектирования

Оцените статью

Одним из наиболее важных элементов системы флуоресцентного детектирования является ячейка детектора. Переход от традиционной ячейки детектирования флуоресценции — кюветы к колоночной или постколоночной ячейке детектирования с объемами нанолитрового-микролитро- вого диапазона создает значительные трудности. Для их устранения применялись использование самого капилляра в качестве проточной ячейки, использование постколоночной системы детектирования (ячейки с жидкой проточной оболочкой) и использование системы с ограничением потока. Использовать капилляр в качестве проточной ячейки наиболее просто. Один из первых внутриколоночных флуоресцентных детекторов для ВЭКЭ описан в работе [46], а первая внутриколоночная ЛИФ-система — в работе [50]. В этой системе использовалось оптическое волокно как для освещения капилляра, так и для сбора излучения (рис. 3.5, а). К недостаткам внутриколоночного метода относятся широкополосный люминесцентный фон и рассеяние от капилляра из кварцевого стекла. В системе с проточной оболочкой эти недостатки сводятся к минимуму. Впечатляющие характеристики дает система с жидкостной проточной оболочкой [58-60]. Конец капилляра вставляется в ячейку с жидкой проточной оболочкой, в которой течет буферный раствор со скоростью, препятствующей смешиванию текущих потоков (рис. 3.5, б). Лазерное излучение фокусируется на выход капилляра, а флуоресценция регистрируется с помощью объектива микроскопа. Поскольку на границе двух потоков показатель преломления не меняется, в поле зрения объектива микроскопа рассеяние невелико. Точечная диафрагма, установленная в плоскости изображения объектива микроскопа, обеспечивает сбор излучения только от потока, протекающего по капилляру, что еще более снижает рассеянное излучение. Ячейка с проточной оболочкой обеспечивает эффективность разделения до миллиона теоретических тарелок и пределы детектирования на уровне 10-13 М (10 молекул) для флуорофоров на основе родамина [44, 61, 62].

Оставить комментарий

Ваш email не будет опубликован. Поля для обязательного заполнения *

*

Подняться вверх