ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ И ПРИМЕРЫ

Специфические белки сыворотки, например альбумин (в концентрации 20 мг/мл), незначительно повышают высоту пиков (на «20 %) по сравнению с водой. Однако, когда в пробе присутствуют не только альбумин (20 мг/мл), но и хлористый натрий (5 мг/мл), высота пиков возрастает на «30 %. Гамма-глобулины вообще не влияют на результаты МЭКХ. Добавление в пробу ПЭГ (полиэтиленгликоля), уменьшающего растворимость многих небольших молекул, может резко увеличить высоту пиков ряда соединений

[23].

а. Пример влияния сывороточной матрицы на анализ фелба- мата. Условия анализа: Л= 214 нм, 35 °С, капилляр 50 мкм я 50 см, буфер — борная кислота 100 мМ/л, рН 8.4, NaOH 2 мМ/л и ДСН 55.4 мМ/л. Был приготовлен исходный раствор 250 мг/л фелбамата в 10 % водном метаноле. Исходный раствор 5-кратно разбавлялся водой или сывороткой. При сравнительно большом объеме пробы (инжекция под давлением осуществлялась в течение 20 с), составлявшем 3 % от объема капилляра, фелбамат, растворенный в сыворотке, имел большую высоту пика, чем в случае растворения в воде (рис. 2.3). Во избежание ошибок в результатах анализа рекомендуется растворять стандартное вещество в той же матрице, что и пробу, или добавлять стандартное вещество непосредственно в пробу.

б. Влияние концентрации ДСН на высоту пиков, время миграции и разделение. Условия анализа: использовались те же условия, что и обозначенные на рис. 2.3, но исходный раствор ацетоацетанилида был приготовлен в 2 % метаноле концентрацией 200 мг/л, а кофеин и ацетаминофен растворялись в воде при концентрации 100 мг/л. Как видно из рис. 2.4, пики острее, выше и лучше разрешены, когда сепарационный буфер содержит 3.2 %, а не 0.8 % ДСН. Однако при этом время миграции становится намного большим. Поскольку МЭКХ используется для анализа широкого круга соединений различной химической структуры, метод проб и ошибок остается важным средством исследования влияния конкретной матрицы на разделение в целом.