Федерации пауэрлифтинга Черновицкой области Ты — творец своего тела, будь сильным!
Этот способ детектирования обладает высокой чувствительностью и избирательностью. Избирательность связана с тем, что детектор регистрирует только те компоненты пробы, которые имеют радиоактивные метки. Возможность осуществлять избирательное мече- ние определенных соединений в живых клетках позволяет использовать обычные методы разделения в чрезвычайно сложных пробах, содержащих тысячи компонентов. Пределы радиохимического детектирования могут отличаться на несколько порядков в зависимости от используемого нуклеотида. Предел детектирования определяется эффективностью мечения, периодом полураспада контролируемого изотопа, общей эффективностью детектирования системы, временем измерения и энергетикой распада. Суммарное число отсчетов на пике электрофореграммы определяется числом радиоактивных превращений, происходящих каждую минуту в зоне инжектированного анализируемого вещества, с достаточно высокой надежностью без высокой вероятности нескольких актов распада во время пребывания анализируемого соединения в ячейке [121].
Оптические схемы радиоизотопного детектирования предполагают использование сцинтиллятора, где энергия распада частиц превращается в свет, который собирается оптической системой и регистрируется фотодетектором. Описано радиоизотопное детектирование элементов 32Р, 14С и 99гаТс для изотахофоретического разделения с использованием капилляров с внутренним диаметром 300 мкм из фторированного сополимера этилен-пропилена [122, 123]. Для регистрации испускаемых частиц использовался счетчик Гейгера—Мюллера или комбинация пластического сцинтиллятора с фотоэлектронным умножителем. Минимальный предел детектирования составлял 0.44 нКи при объеме ячейки 212 нл. Описана конструкция радиоизотопного детектора для «on-line» определения веществ, меченных изотопами 32Р [124]. Использовались параболический пластический сцинтиллятор, окружающий область детектирования капилляра, и усовершенствованный оптический детектор для изотопа 32Р с двумя фотоумножителями, работающими в режиме совпадений при комнатной температуре. В режиме совпадений принимаются только отсчеты, регистрируемые одновременно на обоих фотоумножителях, а все несовпадающие отсчеты отбрасываются. Это обеспечивает чрезвычайно низкий уровень фонового шума, несмотря на использование фотоумножителей, работающих при комнатной температуре. Фактически любое излучение, испускаемое либо средой разделения и кварцевым стеклом (черенковское излучение), либо сцинтилляционным материалом, регистрируется этой системой с эффективностью, близкой к 100 %. При увеличении времени пребывания радиоактивной молекулы в объеме детектирования уменьшается минимальное количество анализируемого вещества, которое можно точно определить с помощью данного детектора. Увеличение времени пребывания в объеме детектирования было осуществлено путем применения программирования, при котором электрофоретическое напряжение уменьшается при проходе пробы с меткой через объем детектирования для уменьшения скорости перемещения зоны [124]. После этого электрофоретическое напряжение возвращают на первоначальный уровень до регистрации очередного вещества с меткой, тогда программирование потока повторяется.
В системах радиоизотопного детектирования «on-line» излучение должно быть достаточно интенсивным, чтобы пройти сквозь стенки капилляра и воздействовать на внешний датчик. Поэтому изотопы 35S и 3Н не могут регистрироваться. Распространение радиоизотопного детектирования в КЭ на эти изотопы (наиболее приемлемые для биологических применений) позволило бы расширить диапазон применения данного метода. Описана постколоночная схема, позволяющая регистрировать изотопы 35S и 3Н [125, 126]. В этой системе элюент из капилляра непрерывно осаждается прямо на поверхность движущейся подложки, содержащей сцинтиллятор. Управляемый компьютером координатный столик позволяет регистрировать последовательность линий на подложке, а после этого происходит детектирование путем получения изображения всей поверхности с помощью охлаждаемого матричного детектора на ПЗС. В отличие от ранее описанных систем КЭ с осаждением на мембрану выходной конец капилляра здесь красится проводящей серебряной краской для замыкания электрической цепи, а мембрана используется сухой. Получены эффективности разделения до 100 000 т.т. Данный подход дает пределы детектирования для 32Р до 90 змол и 17 амол и 8 фмол для 35S и 3Н соответственно. Основная причина улучшения пределов детектирования лежит в увеличении времени наблюдения.
